携带锌指核酸酶的腺相关病毒介导靶向切除HIV-1基因组的体外研究

作者：梁智铭; 杨辛毅; 王亚楠; 王菁; 沈晓婷; 潘浛雨; 杨金龙; 陆盼盼; 赵琳; 梁玥; 朱焕章

来源：复旦学报(自然科学版), 2023, 1-12.

DOI：10.15943/j.cnki.fdxb-jns.20230110.001

• 基因编辑工具
• 人类免疫缺陷病毒1型
• 获得性免疫缺陷综合征
• 锌指核酸酶
• 腺相关病毒

人类免疫缺陷病毒1型(Human Immunodeficiency Virus type 1, HIV-1)能够整合到宿主细胞基因组并通过基因沉默的方式逃避高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Antietroviral Therapy, HAART),而高效特异性的基因编辑工具的出现,有望成功切除HIV-1前病毒基因组。重组腺相关病毒(AAV)是基因治疗的重要载体系统,为了获得能够高效感染T细胞的基因编辑工具递送系统,本研究通过比较过表达增强绿色荧光蛋白的血清型2型、血清型6型、血清型DJ型的重组腺相关病毒,筛选出T细胞系的偏好血清型:6型。通过比较CMV启动子、SFFV启动子,筛选出T细胞系的偏好启动子:SFFV启动子。最后,我们通过制备过表达靶向HIV-1长末端重复序列(Long Terminal Region, LTR)的锌指核酸酶(Zinc Finger Nuclease, ZFN)的AAV6递送载体系统,感染模拟HIV-1阳性表达的细胞系Ya,通过T7E1证实发生特异性切除HIV-1前病毒基因组,通过流式细胞仪证实约17.1%切除效率,通过测序分析进一步证实靶向HIV-1 LTR的ZFN介导细胞基因组中切除HIV-1前病毒基因组。实验证明,6型重组腺相关病毒递送靶向HIV-1 LTR的ZFN能有效切除HIV-1前病毒基因组,为该系统未来的体内应用奠定了基础。

• 单位
  生命科学学院; 复旦大学