摘要
目的:探讨苓桂气化方干预射血分数保留心力衰竭(HFpEF)心肌纤维化的物质基础及分子机制。方法:采用液相色谱-质谱联用法(LC-MS)定性分析苓桂气化方的活性成分。使用AutoDock软件进行苓桂气化方的活性成分与目标蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)之间的分子对接。进行体内实验:40只4周龄自发性高血压大鼠(SHR)平均分为HFpEF组、诺欣妥组(0.018 g·kg-1)、苓桂低剂量组(3.87 g·kg-1)及苓桂高剂量组(7.74 g·kg-1),给予高脂、高盐及高糖饮食16周和腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只WKY大鼠和10只SHR大鼠作为空白组。造模成功后,WKY、SHR及HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(LV)前壁厚度(LVAWd)、LV后壁厚度(LVPWd)、LV舒张末内径(LVIDd)、LV射血分数(LVEF)、等容舒张时间(IVRT)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)及LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e’),并计算E/e’;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清心房钠尿肽(ANP)、B型利钠肽(BNP)及半乳糖凝集素-3(Gal-3);病理切片进行马松染色以观察心肌纤维化,并计算胶原体积分数(CVF)及血管周围纤维化比率(PFR);实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LV心肌α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、MMP-9、TIMP-1的mRNA及蛋白表达。结果:LC-MS鉴定出苓桂气化方含有13种活性成分。分子对接提示13种化合物能稳固地与5个靶蛋白结合。体内实验证实:与空白组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、IVRT、E/e’、ANP、BNP、Gal-3、CVF及PFR显著升高,LV心肌α-SMA、ColⅠ、ColⅢmRNA表达及蛋白表达显著上调,MMP-9/TIMP-1mRNA及蛋白比例明显下调(P<0.05,P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方可能呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、IVRT、E/e’、ANP、BNP、Gal-3、CVF及PFR,下调心肌α-SMA、ColⅠ、ColⅢmRNA表达及α-SMA和ColⅠ蛋白表达,并上调MMP-9/TIMP-1的mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:苓桂气化方含有多种活性成分,可能抑制HFpEF大鼠的心肌纤维化,进一步减轻LV肥厚、扩大及舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。
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