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摘要
目的 探讨沉默BLMDNA解旋酶基因对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖和凋亡的影响。方法 利用数据库分析BLM DNA解旋酶在乳腺癌组织中的表达情况及后评估价值，免疫组织化学技术检测三阴性乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和癌旁组织中BLM DNA解旋酶表达，Western blot检测MCF-10A细胞、MCF-7细胞、MDA-MB-468细胞中BLM DNA解旋酶蛋白表达水平；合成siRNA序列沉默MDA-MB-468细胞中BLMDNA解旋酶基因的表达，选取沉默效率最高的siRNA-BLM 3序列构建shRNA干扰载体慢病毒；将慢病毒感染MDA-MB-468细胞分为shRNA-NC组和shRNA-BLM组，MTT、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡情况，单细胞凝胶电泳技术检测与DNA损伤相关的细胞尾部DNA含量，免疫细胞化学检测DNA损伤标志物γ-H2AX表达情况，Western blot检测凋亡相关蛋白及DNA损伤修复蛋白表达情况。结果 生物信息学分析显示BLM DNA解旋酶在乳腺癌组织中高表达，且与乳腺癌患者不良预后密切相关；三阴性乳腺癌组织BLM DNA解旋酶表达水平高于乳腺纤维腺瘤和癌旁组织（P<0.001）；与MCF-10A细胞、MCF-7细胞比较，MDA-MB-468细胞中BLM DNA解旋酶蛋白表达水平升高（P<0.01）；与未转染组比较，siRNA-BLM 3组BLM DNA解旋酶蛋白表达下调（P<0.05）；与shRNA-NC组比较，shRNA-BLM组细胞增殖能力被抑制、凋亡率升高、尾部DNA含量增加、γ-H2AX阳性细胞比例升高（P<0.01）、凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8表达上调，Bcl-2及DNA损伤修复蛋白BRCA1、Rad51、BLM表达下调（P<0.05）。结论 沉默BLMDNA解旋酶基因表达抑制三阴性乳腺癌细胞增殖，促进细胞凋亡，凋亡机制可能与细胞DNA损伤增加，DNA损伤修复相关蛋白受抑制有关。
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单位贵州医科大学; 基础医学院
