人精原干细胞分离、培养及鉴定

作者：刘世学; 唐伟; 熊涛

来源：第三军医大学学报, 2011, (06): 570-573.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2011.06.009

• 精原干细胞
• 分离
• 培养
• 鉴定 spermatogonial stem cells
• separation
• culture
• identification
• enzyme digestion

目的采用两种酶两步法分离培养人睾丸精原干细胞。方法先后应用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶消化法,Percoll密度梯度离心,差异贴壁法,进行人精原干细胞的分离及培养;采用细胞免疫荧光法进行人精原干细胞的鉴定;流式细胞法对Oct-4标记阳性的细胞进行筛选,并同时检测所获精原干细胞的纯度,建立精原干细胞和支持细胞共培养体系。结果两种酶两步法消化的人睾丸细胞悬液活细胞率为91.07%,Percoll密度梯度离心结合差异贴壁离心纯化后的细胞经Oct-4细胞免疫荧光法检测表达阳性,流式细胞技术检测阳性细胞所占比例为86.7%,该阳性细胞能够在支持细胞饲养层上稳定生长30 d。结论所获Oct-4表达阳性细胞为精原干...

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院