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摘要
为高效获得可溶性LrrG上清蛋白，本文通过密码子优化构建了LrrG优化后的pCzn1-LrrG重组表达载体，并转染BL21（Plys）感受态细胞，高效表达无乳链球菌富含亮氨酸重复序列（LrrG）蛋白。首先根据大肠杆菌密码子偏好性，优化并人工合成LrrG全基因序列，经双酶切后插入至表达载体，将优化后的重组质粒pCzn1-LrrG转染至感受态细胞进行原核表达，经裂解和纯化后，获得上清重组蛋白LrrG。结果表明：PCR扩增得到2286 bp的优化LrrG基因片段，构建的重组质粒pCzn1-LrrG经双酶切获得约4400 bp和2286 bp的两条片段，与预期值相符；对重组载体测序，测序结果与优化后的基因碱基序列比对结果完全一致，编码的氨基酸序列未发生突变；SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果显示，获得相对分子质量约为108 000的LrrG重组蛋白，与理论值相符，且优化后LrrG重组蛋白具有GBS抗原反应原性; 通过亲和层析纯化LrrG上清蛋白后，发现优化后可溶性LrrG上清蛋白表达量相对优化前提高了2.2～3.8倍。初步免疫罗非鱼后，发现优化后的LrrG重组蛋白对罗非鱼抗GBS感染具有61.54%～69.23%的相对免疫保护率。研究表明，按照大肠杆菌密码子进行优化GBS表面蛋白LrrG，可以有效提高其在大肠杆菌中的表达量，且优化后的LrrG重组蛋白仍然具有较好的免疫原性，本研究结果为基于无乳链球菌表面蛋白LrrG基因工程疫苗的制备和应用奠定了前期基础。
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