摘要
目的观察高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对肾癌细胞ACHN周期及凋亡的影响,为肾肿瘤后续机制探讨提供根据。方法培养肾癌细胞ACHN,选择HMGA2三个不同的基因片段分别为HMGA2-siRNA1、HMGA2-siRNA2、HMGA2-siRNA3与虚拟基因片段(Mock-siRNA),利用RNA干扰技术,瞬时转染肾癌ACHN细胞,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测HMGA2mRNA及蛋白表达;PI染色及流式细胞仪检测干扰后ACHN细胞周期的变化。Annexin V-FITC检测干扰后ACHN细胞凋亡效应的影响。结果成功构建使HMGA2基因沉默的肾癌细胞株,并选择HMGA2-siRNA2进行后续试验。细胞周期分析表明,进入Go/G1期的细胞明显增多,而G2/M期的细胞减少,细胞增殖周期阻滞在G1期(P <0.05)。沉默HMGA2基因表达后,肾癌ACHN细胞呈现出明显的早期和晚期凋亡,总体凋亡率从5.69%上升到16.52%(P<0.05)。结论用HMGA2-siRNA干扰ACHN细胞,细胞的周期发生紊乱,凋亡情况明显增强,说明HMGA2在肿瘤的发生、发展、细胞周期和凋亡过程中发挥着重要作用,有望成为治疗肾癌的一个重要靶点,深入研究HMGA2基因对肾癌的靶向治疗具有深远意义。
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单位大连大学附属中山医院