蛋白G IgG Fc段结合域的克隆表达及功能研究

作者：房国梁; 刘志国; 宗义强; 张大川; 曾丽娟; 付云洁; 屈伸

来源：生物技术通报, 2009, (09): 111-116.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2009.09.011

• 蛋白G IgG Fc段结合域
• 多克隆抗体
• 原核表达

旨在研究蛋白G IgG Fc段结合域(PGFB)的克隆、表达及其抗体结合功能,用于抗体的纯化。根据PGFB的氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成了4个寡核苷酸片段。通过重叠延伸PCR方法合成了PGFB DNA片段,测序鉴定后克隆至原核表达系统pET-28a-c(+)上,转化大肠杆菌,获得表达菌株;IPTG诱导表达PGFB,经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化后偶联到琼脂糖凝胶6B上,用其纯化多克隆抗体。结果显示,PGFB在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,纯化后纯度达到90%以上,相对分子量为12.25 kD,与预期值相符。此外,偶联产物纯化多克隆抗体达到了良好的效果,每毫升基质可结合20 mg抗体。本研究克隆构建并高效表达了具有较好抗体亲和能力的PGFB,为多克隆抗体的快速纯化提供了方便。

• 单位
  武汉轻工大学; 华中科技大学同济医学院