重组降血压肽表达系统的构建及表达多肽的鉴定

作者：王小莉; 刘冬; 梁世中

来源：现代食品科技, 2009, 25(2): 129-132,161.

DOI：10.3969/j.issn.1673-9078.2009.02.003

• 降血压肽
• 序列设计
• pET-15b-ACEIP
• 构建
• 表述
• 鉴定

通过对降血压肽结构和功能的分析,设计合成了一条小肤VPVLPK.通过测定其对ACE酶的抑制活性,发现此肽具有很好的降血压活性IC50为4.2μmol/L.根据大肠杆菌偏爱密码子人工合成此肽的6拷贝片段,将其克隆至表达载体pET-15b并转化到宿主菌E.coil BL21(DE3)中.筛选阳性克隆,通过双酶切、PCR及测序表明,本研究已成功构建出重组降血压肽质粒pET-15b-ACEIP的表达系统.IPTG诱导表达后的菌体通过Tricne-SDS-PAGE小分子多肽电泳检测在5.8～7.8kDa之间出现目的蛋白条带,这与理论蛋白分子量6.2kDa相符,且目的蛋白主要存在于超声破碎的上清液中.上清液用胰蛋白酶酶切后,通过HPLC鉴定证实为目的多肤,且多肤的含量达130mg/L.

• 单位
  华南理工大学