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摘要
目的通过Western blot方法检测质膜钙ATP酶异构体13(plasma membrane Ca2+-ATPase isoforms 13,PMCA13)在新生大鼠耳蜗基底膜(basilar membrane,BM)的表达,并检测PMCA2在单个新生大鼠耳蜗毛细胞纤毛的表达量。方法 1取出生后2天(P2)和8天(P8)健康SD大鼠各4只,断头后分离出BM,提取总蛋白,分别取20μg,通过Western blot法检测BM的PMCA13表达。2取P2和P8大鼠BM总蛋白3μg,通过Western blot方法检测BM的PMCA2的表达。3取4只P8大鼠,分离出BM,提取总蛋白,分别取5、10、20μg总蛋白并取100、400和800ng牛血清白蛋白(BSA)作为对照组,跑完电泳后将胶分为2部分,部分泳道用于SYPRO染胶,其余泳道用于Western blot检测PMCA2的表达。结果 1在20μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,PMCA1仅有微弱的表达(分别为0.126±0.024、0.131±0.012),PMCA2表达水平较高(分别为4.16±0.528、4.25±0.319),PMCA3几乎没有表达(均为0),三者间差异有统计学意义(P<0.05)。2在3μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,P8大鼠PMCA2的表达水平(4.571±0.336)高于P2大鼠(3.622±0.285),差异有统计学意义(P<0.05)。3PMCA2在单个P8大鼠BM的含量约为2.5ng。结论 PMCA13在新生大鼠耳蜗BM的表达水平不同,PMCA2表达量最大,这可能是由于耳蜗毛细胞对这几种PMCA亚型有不同的Ca2+调节需求。
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单位华中科技大学同济医学院附属同济医院; 湖北文理学院; 襄阳市中心医院
