摘要
【目的】探讨穿心莲内酯(Andro)是否通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌(Mtb)感染的巨噬细胞焦亡。【方法】构建Mtb H37Ra感染的小鼠RAW264.7巨噬细胞模型。实验分5组:Control组(对照组)为未作处理的巨噬细胞;Mtb组为经Mtb感染的巨噬细胞;Mtb+Andro组为巨噬细胞经Mtb感染后,给予Andro处理;Mtb+Andro+miR-NC组或Andro+Mtb+miR-342-3p组为巨噬细胞经Mtb和Andro联合处理后,分别转染miR-NC或miR-342-3p mimic。各组处理后,利用细胞流式术分析细胞凋亡,乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测LDH活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞焦亡相关的炎性因子白细胞介素(IL)-6和IL-18含量,荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定miR-342-3p表达,Western Blot法检测GSDMD、Caspase-1、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达。【结果】与Control组比较,Mtb组和Mtb+Andro组的细胞凋亡率,LDH活力,IL-6、IL-18含量,miR-342-3p表达,GSDMD、Caspase-1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与Mtb组比较,Mtb+Andro组的细胞凋亡率,LDH活力,IL-6、IL-18含量,miR-342-3p表达,GSDMD、Caspase-1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。另外,与Mtb+Andro+miR-NC组比较,Mtb+Andro+miR-342-3p组上述指标均升高(P<0.05)。【结论】Andro通过下调miR-342-3p表达,减少Mtb感染的巨噬细胞炎症和细胞焦亡,其分子机制与Nrf2/HO-1通路有关。
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单位黑龙江省传染病防治院