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摘要
为探究针对多重耐药铜绿假单胞菌(P. aeruginosa,PA)裂解性噬菌体生物学特性及其基因组结构特征，本研究以一株人源多重耐药PA 3099-2aT株为宿主菌，从养殖场污水中分离纯化到一株噬菌体，命名为p PA-3099-2aT.2。噬菌体经磷钨酸染色后采用透射电镜观察形态，经双层平板法测定其对温度和酸碱的稳定性、绘制一步生长曲线，通过双层平板法测定该噬菌体对各试验菌株的裂解情况确定其宿主谱，通过测定不同感染复数(MOI)细菌和噬菌体混合液的OD595nm分析该噬菌体体外抑菌效果，通过不同浓度的PA 3099-2a T对大蜡螟幼虫致病性及攻毒保护率试验检测噬菌体体内抑菌效果。结果显示，噬菌体p PA-3099-2aT.2头部直径约为76.69 nm，有尾鞘，尾长123.89 nm，形态学分类为肌尾噬菌体；在-20℃～60℃和p H值为4～10的环境中稳定性良好，最适p H值为6，最适温度为37℃，潜伏期小于10 min，裂解期持续至100 min，裂解量约为178 pfu/cell；能裂解ST198型、ST274型、ST3683型、ST3875型、ST3216型等8株不同来源的PA；体外抑菌效果良好，其中MOI 0.01抑菌效果最好，能在0～15 h内有效抑制细菌生长；在体内也具有良好的抑菌效果，该噬菌体对大蜡螟幼虫的保护率与其MOI呈正相关，24 h内该噬菌体的MOI为100时对大蜡螟幼虫的保护率为100%,MOI 1时对大蜡螟幼虫的保护率为60%,MOI 0.01时对其的保护率为40%。采用高通量测序技术对p PA-3099-2aT.2进行全基因组测序，并于GenBank数据库下载32条噬菌体N-乙酰胞壁酰胺酶氨基酸序列，分析其遗传演化规律，采用DNAMAN v6对p PA3099-2aT.2、噬菌体JG004 lysozyme (Pae87)和v B＿PaeM＿C2-10＿Ab1的N-乙酰胞壁酰胺酶的氨基酸序列进行比对分析。全基因组测序结果显示，p PA-3099-2a T.2基因组为ds DNA，长度为93 031 bp,GC含量49.4%，含有穿孔素、N-乙酰胞壁酰胺酶、细胞壁水解酶等裂解相关蛋白；N-乙酰胞壁酰胺酶进化分析结果显示，该蛋白在噬菌体帕克普纳属和宿主菌铜绿假单胞菌种具有较高的保守性，与噬菌体JG004 lysozyme (Pae87)该蛋白氨基酸序列同源性为98.39%，但存在3个氨基酸突变。上述结果表明，噬菌体p A-3099-2a T.2具有生物学稳定性、潜伏期较短、裂解能力强、识别多种ST型宿主菌和抑菌效果良好等特性，能够显著提高感染多重耐药PA大蜡螟幼虫的存活率，为噬菌体治疗多重耐药PA感染提供参考依据。
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