CRISPR/Cas9技术构建MMACHC基因c. 80A>G(p. Q27R)纯合突变甲基丙二酸血症小鼠模型

作者：王薇; 毛莹莹; 郑萍; 程沛迪; 张文超; 吴小兵; 马文豪^*; 陈倩^*; 张学

来源：中国医学前沿杂志(电子版), 2023, 15(06): 34-39.

DOI：10.12037/YXQY.2023.06-07

• CblC型甲基丙二酸血症
• MMACHC基因
• CRISPR/Cas9
• 小鼠模型

目的 利用CRISPR/Cas9技术构建MMACHC基因c.80A>G (p. Q27R)纯合突变的cbl C型甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症小鼠模型。方法 利用CRIPSR/Cas9基因编辑技术,将小鼠MMACHC基因第80位碱基由碱基A突变为碱基G,在靶位点区域设计单链导向RNA (single-guide RNA,sg RNA),构建打靶载体,将Cas9/sg RNA及打靶载体显微注射到小鼠受精卵中,培育获得F0代小鼠,以小鼠鼠尾鉴定基因型,将点突变阳性F0代小鼠与野生型小鼠交配获得具有稳定基因型的F1代小鼠,F1代小鼠交配繁育获得MMACHC基因c.80A>G纯合突变型小鼠,对纯合型小鼠、杂合型小鼠、野生型小鼠进行血代谢产物甲基丙二酸和总同型半胱氨酸检测。结果 获得12只MMACHC基因c.80A>G点突变阳性的F1代小鼠,并进行培育繁殖扩大种群,获得纯合突变型小鼠,纯合型小鼠无早期死亡,其血甲基丙二酸、总同型半胱氨酸水平显著高于杂合型和野生型小鼠(P<0.05),杂合型和野生型小鼠血甲基丙二酸、总同型半胱氨酸水平无差异(P>0.05)。结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建MMACHC基因c.80A>G (p. Q27R)纯合突变的cbl C型甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症小鼠模型。

• 单位
  首都儿科研究所附属儿童医院; 中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院; 神经内科