猪流行性腹泻病毒N蛋白核仁定位信号对宿主细胞周期的影响

作者：刘随新; 石达; 陈建飞; 张鑫; 时洪艳; 刘孝珍; 张莎; 王璐; 冯力

来源：中国预防兽医学报, 2013, (03): 173-176.

• 猪流行性腹泻病毒
• 核衣壳蛋白
• 核仁定位信号
• 流式细胞术
• 宿主细胞周期 porcine epidemic diarrhea virus
• nucleocapsid protein
• nucleoli localization signal
• flow cytometry
• cell cycle

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与宿主细胞相互作用,本研究根据前期已经鉴定的PEDV N蛋白核仁定位信号序列,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法扩增出核仁定位信号序列缺失的PEDV N基因(dN),并将其与真核表达载体pAc-GFP-C1连接,构建重组质粒pAc-GFP-dN。将pAc-GFP-dN转染于Vero E6细胞中,利用激光共聚焦显微镜分析重组质粒pAc-GFP-dN表达蛋白的定位情况,并利用流式细胞仪检测转染细胞的周期变化。实验结果表明:与完整的N蛋白相比,缺失核仁定位信号的N蛋白不能定位于细胞核仁,同时丧失了使宿主细胞周期在G2/M期停滞的能力,从而揭示了...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室; 东北农业大学