A型塞内卡病毒VP2蛋白间接ELISA检测方法的建立

作者：申珊; 史雪坤; 李蕊; 马玉忠; 秦建华; 汪恩强^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(02): 152-158.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0013

• A型塞内卡病毒
• 抗体
• 间接ELISA

为建立一种检测塞内卡病毒VP2蛋白的间接ELISA方法,本试验将A型塞内卡病毒(SVA) VP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了筛选。结果显示,VP2蛋白包被量为2μg/m L(1∶1 000稀释);用2%BSA封闭液稀释标准阳性血清为1∶20;二抗做1∶5 000稀释;TMB底物显色液室温避光显色反应10 min。特异性试验结果显示,同FMDV、PRRSV、CSFV、PRV和APP阳性血清均无交叉反应。此方法对塞内卡病毒阳性血清的敏感性为1∶160。批间、批内重复性试验结果的变异系数均小于10%。对200份猪血清样本分别进行间接荧光抗体免疫方法和间接ELISA方法的检测,结果符合率为95.5%。上述结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查。

• 单位
  河北农业大学