SARS-CoV-2核衣壳蛋白预测与原核重组表达应用

作者：秦小波^*; 高华; 张冰冰; 高继海^*

来源：生物学杂志, 2021, 38(04): 17-22.

• 冠状病毒
• 核衣壳蛋白
• SARS-CoV-2
• 原核表达
• 间接ELISA

为了优化构建SARS-CoV-2核衣壳蛋白原核表达载体并获得大肠杆菌表达的重组融合蛋白,研究利用公开的基因组数据与在线各蛋白质预测工具分析SARS-CoV-2核衣壳蛋白与其他β-CoV核衣壳蛋白的异同,以及二、三级结构情况;为合成、构建大肠杆菌表达系统密码子优化的SARS-CoV-2核衣壳蛋白原核表达载体提供辅助。基于生物信息分析,设计并构建含His标签的重组原核载体pET-N,转化BL21大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,亲和层析法纯化重组融合蛋白,并经SDS-PAGE与Western Blot进行鉴定。预测分析了SARS-CoV-2核衣壳蛋白的序列特征与结构情况;并成功获得原核表达重组载体pET-N,发现其重组融合蛋白在上清液与包涵体中都存在,通过破碎包涵体,纯化获取目的蛋白,为间接ELISA法检测感染者血清中抗体所需的ELISA包被抗原提供参考。

• 单位
  成都市第三人民医院; 成都大学; 成都中医药大学; 四川省自然资源科学研究院