小麦麦谷蛋白高分子量亚基N端序列克隆及原核表达分析

作者：王志成; 王琦; 张长付; 张聪聪; 王泽濠; 张霞; 王金水^*

来源：河南工业大学学报(自然科学版), 2023, 44(04): 60-66.

DOI：10.16433/j.1673-2383.2023.04.008

• 麦谷蛋白高分子量亚基
• 1Dx5-N
• 末端结构域
• 原核表达

为了探究麦谷蛋白高分子量亚基(HMW-GS)的N-末端结构域对面粉品质的影响，以HMW-GS的1Dx5的N-末端结构域(1Dx5-N)为目的基因进行序列克隆及原核表达，研究大肠杆菌BL21(DE3)为载体菌进行转化，鉴定阳性克隆，以IPTG和乳糖作为诱导剂，并通过正交试验，筛选最佳的诱导条件。结果表明：1Dx5-N序列基因全长267 bp,共编码氨基酸89个，预测分子质量为16.211 kDa;经转化、阳性克隆鉴定后，证明了该表达载体能够在大肠杆菌中稳定遗传；IPTG和乳糖均可诱导1Dx5-N进行表达；SDS-PAGE表明1Dx5-N重组蛋白多为包涵体蛋白；IPTG诱导蛋白最佳表达条件为温度30℃,浓度0.6 mmol/L,诱导时间16 h;乳糖诱导蛋白最佳表达条件为温度30℃、质量浓度9 g/L、诱导时间16 h。通过对比发现，乳糖可代替IPTG诱导1Dx5-N蛋白表达。

• 单位
  生物工程学院; 河南工业大学