摘要
该研究旨在探究HPV-18 E7蛋白通过SIRT1在HPV感染的宫颈癌细胞增殖、凋亡、自噬中的作用。利用HPV-18 E7靶向小干扰RNA(E7-siRNA)抑制HPV-18 E7的表达, CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞凋亡情况, Western blot检测细胞自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达水平, qRT-PCR和Western blot分别检测SIRT1的mRNA和蛋白表达水平。利用表达载体在HaCaT细胞表达HPV-18 E7蛋白,再分别通过qRT-PCR和Western blot检测SIRT1的mRNA和蛋白表达水平。最后,利用SIRT1激动剂(SRT1720)预处理细胞, CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞凋亡情况, Western blot检测细胞自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达水平。结果发现, E7-siRNA沉默HPV-18 E7的表达后,细胞增殖和自噬显著减弱,凋亡水平升高, SIRT1的mRNA和蛋白表达水平显著降低。在HaCaT细胞表达HPV-18 E7蛋白后,发现HPV-18 E7可促进SIRT1的表达。SIRT1激动剂处理可以促进HPV-18 E7基因沉默导致的低水平细胞增殖,缓解HPV-18 E7基因沉默导致的细胞凋亡,提高自噬相关蛋白Beclin1表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值。总之, HPV-18 E7可以促进HeLa细胞SIRT1的表达,并通过SIRT1进而促进细胞的增殖和自噬,抑制细胞凋亡。
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单位复旦大学附属金山医院