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摘要
目的 建立同时检测经典骨髓增殖性肿瘤患者中常见的Janus激酶2(Janus kinase 2, JAK2)、钙网素（calreticulin,CALR）和骨髓增殖性白血病病毒（myeloproliferative leukemia virus,MPL）基因突变的多重聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）-高分辨熔解分析（high resolution melting analysis,HRM）体系。方法 先以各个合成的突变等位基因片段为模板分别进行PCR和HRM分析，优化PCR体系后，在单管中进行多重PCR扩增和HRM分析，同时检测上述三个基因的8种常见突变。结果 在适宜的条件下，上述三个基因的野生型和突变型均能扩增出各自的目的条带和收集到可区分的熔解峰，野生型与突变型的熔解温度差为0.3℃～2.0℃。多重PCR-HRM体系中，除JAK2外显子12相关片段，其他基因均可有效扩增，但JAK2 V617F突变型的扩增效率明显低于MPL及CALR基因。结论 目前该多重PCR-HRM检测体系可鉴别MPL和CALR基因常见突变，但JAK2 V617F突变型由于扩增效率低导致突变峰与野生峰不能明显区分，JAK2 V617F和外显子12的引物需重新设计。
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单位深圳大学总医院; 北京大学深圳医院
