电针原发性高血压模型大鼠太冲、曲池穴观察microRNA-9对其下游靶点P2X7受体、炎性因子、血管紧张素Ⅱ的影响

作者：岳炳南; 孙娇; 李晓璐; 周子娴; 刘鑫; 刘清国^*

来源：环球中医药, 2022, 15(12): 2342-2349.

• 微核糖核酸
• P2X7受体
• 电针
• 原发性高血压

目的 通过观察microRNA-9对其下游靶点P2X7受体、炎性因子、血管紧张素II的影响，分析电针降压机制。方法 选择原发性高血压模型大鼠(spontaneous hypertension rat, SHR)作为高血压动物模型，将SHR随机分为4组：假手术组、miR9抑制剂+电针组、电针组、模型组，Wistar大鼠作为空白组(共5组，每组10只)。其中，miR9抑制剂+电针组在SHR室旁核内行双极插管植入术后注射microRNA-9抑制剂(每单侧100 nL/天),假手术组、电针组注射等剂量脑脊液。术后5天进行电针干预，穴取双侧太冲、曲池。在电针前和电针后3、7、10、14天测量收缩压，连续电针治疗2周后取材，通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)对各组大鼠下丘脑microRNA-9的表达进行定量检测，利用qPCR和蛋白免疫印迹法(western blot, WB)检测各组大鼠P2X7受体的mRNA和蛋白水平，使用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, Elisa)检测下丘脑室旁核和血浆中炎性因子白介素(interleukin, IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α和血管紧张素II(angiotensin II, ANG II)的含量。最后使用抗体Iba1进行免疫组化染色，评估下丘脑室旁核内小胶质细胞的活化程度。结果 (1)与假手术组相比，电针组降低了高血压大鼠的收缩压(P<0.01),与电针组相比，miRNA9抑制剂+电针组的降压效果下降(P<0.05);(2)电针组与miRNA9抑制剂+电针组、假手术组相比，miRNA9水平明显升高(P<0.01);(3)与miRNA9抑制剂+电针组相比，电针组室旁核、血清中的IL-6含量更低(P<0.01,P<0.01),与miRNA9抑制剂+电针组相比，电针组室旁核、血清中的TNF-α含量更低(P<0.05,P<0.05);(4)与假手术组相比，电针组的ANGII含量下降明显(P<0.01),但电针组与miR-9抑制剂+电针组ANGII的含量相比无统计学差异(P>0.05);(5)与假手术组相比，电针组降低了P2X7受体的蛋白及mRNA表达(P<0.01,P<0.01),与电针组相比，miRNA9抑制剂+电针组中P2X7受体的蛋白及mRNA表达明显较高(P<0.01,P<0.01);(6)免疫组化染色结果显示，电针组与miRNA9抑制剂+电针组、假手术组相比，室旁核小胶质细胞激活程度明显降低(P<0.01,P<0.01)。结论 电针干预后影响了SHR下丘脑室旁核内miRNA-9的表达，并可能通过抑制P2X7受体的表达、炎症因子IL-6、TNF-α的释放、小胶质细胞的激活，从而降低血压。

• 单位
  北京中医药大学