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摘要
目的构建恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体,观察MyD88siRNA对树突状细胞中MyD88蛋白表达的影响。方法将合成的MyD88RNAi片段与质粒载体连接,转化进化学感受态的大肠杆菌,然后进行菌落PCR鉴定、阳性克隆测序及质粒的抽提;然后转染HEK293细胞,将获得的重组腺病毒进行两轮扩增后进行纯化;用终点稀释法测定腺病毒滴度;Western blot检测MyD88siRNA对树突状细胞中MyD88蛋白表达的作用。结果阳性克隆PCR鉴定与理论条带一致,测序鉴定通过,腺病毒载体转染树突状细胞,Western blot检测显示干扰组MyD88蛋白表达降低。结论成功构建恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体,MyD88siRNA对恒河猴树突状细胞中的MyD88蛋白表达具有抑制作用。
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