"两步法"建立裸鼠肾癌活体生物发光肿瘤模型

作者：陈伶俐; 林乐成; 静雅杰; 陈志鸿^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(06).

• 肾癌细胞
• 肿瘤模型
• 生物发光成像
• 裸鼠

目的建立人肾癌细胞裸鼠活体生物发光成像肿瘤模型。方法将可表达荧光素酶基因的pcDNA3.1-Luc2质粒转染至肾癌细胞系A498细胞中, 利用G418筛选法构建能够表达荧光素酶的稳定转染细胞系, 命名为"A498-Luc2"细胞, 并进行体外细胞生物发光成像检测。将A498-Luc2细胞通过细胞悬液注射法建立重度联合免疫缺陷(SCID)鼠皮下荷瘤模型, 并应用小动物活体成像系统观察肿瘤发光情况, SCID鼠左侧肿瘤组织的发光强度为9.758×105 p/s, 右侧的发光强度为7.100×105 p/s。待皮下肿瘤生长至一定体积后, 处死SCID小鼠获取肾癌组织, 并通过组织块接种法接种至BALB/c裸鼠皮下, 即通过两步法建立肾癌裸鼠皮下荷瘤模型。成瘤后, 定期观察肿瘤生长情况, 并应用小动物活体成像系统观察肿瘤组织发光情况。各组数据均满足正态性且两组方差相等, 采用t检验进行组间比较, 不满足则考虑非参数秩和检验。结果通过G418筛选法成功建立稳定表达荧光素酶的稳定转染细胞系"A498-Luc2"细胞。生物发光成像结果显示, A498-Luc2细胞发光强度与细胞数目呈正相关。当细胞数量达到1.000×106个时, 细胞发光强度为1.776×108 p/s。组织块接种法接种BALB/c裸鼠皮下约14 d后长出肿瘤, 成瘤率为95%(P<0.01), 差异有统计学意义。并随天数的增加体积逐渐增大、肿瘤发光信号逐渐增强。在第32天时, 裸鼠肿瘤组织的发光强度达到最强为2.374×108 p/s, 差异有统计学意义。结论本研究构建稳定表达荧光素酶的人肾癌细胞系, 并通过两步法成功建立裸鼠肾癌生物发光肿瘤模型, 为后续研究奠定基础。

• 单位
  右江民族医学院; 基础医学院