摘要

背景与目的:Tet-off系统是一个高效、低毒、具有严密开关功能的基因调控系统,本研究构建质粒pTre-IFNγ,初步探讨Tet-off系统调控人干扰素γ(interferon-gamma,IFNγ)基因在小鼠骨髓基质细胞中的表达。方法:SacⅡ、XbaⅠ双酶切载体pTre及目的基因,T4连接酶连接,重组体经双酶切、测序鉴定;脂质体介导pTet-off及pTre-IFNγ共转染小鼠骨髓基质细胞;RT-PCR法检测IFNγmRNA,ELISA法检测分泌到培养液中的IFNγ蛋白,分析共转染后IFNγ的分泌规律、共转染后48h中不同浓度盐酸四环素对IFNγ蛋白分泌的影响及在共转染后第48h加入盐酸四...