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摘要
目的：运用经方大黄?虫丸(DHZCW)干预大鼠心肌纤维化模型，观察其对大鼠心肌纤维化的影响并探讨其作用机制。方法：选用SPF级雄性昆明种大鼠36只，分为空白组、模型组和DHZCW低、中、高剂量组(0.056、0.084、0.168 g·kg-1)、卡托普利组(10 mg·kg-1)组，每组6只。除空白组外，其余各组在大鼠腹腔注射异丙肾上腺素溶液5 mg·kg-1，连续15 d，复制心肌纤维化模型。造模开始时便同时给药，给药后28 d处死各组大鼠，取血清及心脏组织进行相关检测。采用苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色，观察组织炎症、细胞变性、坏死及纤维化等情况。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠和大鼠血清中的羟脯氨酸(HYP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、大鼠血清中透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测关键通路蛋白转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测关键通路基因TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7、微小RNA(miR)-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5p的mRNA表达水平。结果：与空白组比较，模型组中的纤维化病理损伤改变明显，血清HYP、TNF-α、IL-1β、IL-6、HA、LN和PCⅢ含量均升高(P<0.01),TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量升高(P<0.01),Smad7蛋白含量降低(P<0.01)。TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Smad7、miR-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5pmRNA表达降低(P<0.01)；与模型组比较，给药28 d后，DHZCW高、中、低剂量组和卡托普利组血清HYP、TNF-α、IL-1β、IL-6、HA、LN和PCⅢ含量均降低(P<0.01)，除低剂量组，TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量降低，Smad7升高(P<0.01);DHZCW高剂量组中TGF-β1、Smad2、α-SMA、Smad3 mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01),Smad7、miR-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5p mRNA升高(P<0.05);DHZCW中剂量组的TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01)，而Smad7 mRNA升高(P<0.01);DHZCW低剂量组TGF-β1、Smad2 mRNA降低(P<0.01)。结论：DHZCW能改善大鼠心肌纤维化，其作用机制可能与调控TGF-β1/Smads/miR-29通路有关，且在0.056～0.168 g·kg-1存在剂量依赖性，高剂量组效果更加稳定。
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单位公共卫生学院; 成都中医药大学; 成都中医药大学附属医院
