水牛γ干扰素的原核表达及其抗病毒活性

作者：李小凤; 谢芝勋^*; 武晓倩; 范晴; 谢志勤; 韦悠; 谢丽基; 万丽军; 王盛; 张艳芳; 黄娇玲; 罗思思

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (14): 124-140.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.05.0198

• 水牛
• γ干扰素
• 原核表达
• 抗病毒活性
• 质谱分析

为了获得具有抗病毒活性的水牛γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)蛋白，试验采用PCR方法扩增水牛IFN-γ基因编码区序列，将其与pET-32a载体连接，构建重组表达质粒pET32a-IFN-γ,并将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，用IPTG诱导表达目的蛋白，对表达的重组蛋白进行SDS-PAGE分析、纯化、Western-blot鉴定与质谱分析，以及抗病毒活性检测。结果表明：水牛IFN-γ基因编码区序列PCR扩增产物大小约为520 bp;重组表达质粒pET32a-IFN-γ的双酶切和测序鉴定结果均正确；阳性菌株经诱导后表达的重组蛋白大小约为39 ku,主要以可溶性蛋白形式表达，且能与His标记小鼠源单克隆抗体发生特异性反应，其肽段氨基酸序列与目的蛋白氨基酸序列完全匹配；纯化后的重组蛋白IFN-γ能够有效抑制牛病毒性腹泻病毒引起的细胞病变，抗病毒活性约为294.1 U/mg。说明水牛IFN-γ蛋白在大肠杆菌中成功表达，并具有一定抗病毒活性。

• 单位
  广西壮族自治区兽医研究所