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摘要
目的 构建马达蛋白KIF5B基因重组慢病毒过表达和RNA干扰载体并进一步构建稳定转染结直肠癌细胞模型，检测敲低KIF5B蛋白对结直肠癌细胞增殖的影响。方法 将PCR扩增的人KIF5B基因序列和设计合成的shRNA序列分别插入GV-358和GV-248表达载体。采用慢病毒三质粒包装系统共转染HEK293T细胞，进行病毒包装和扩增。重组慢病毒感染结直肠癌细胞，荧光显微镜观察绿色荧光强度，Western blot法检测KIF5B过表达和沉默效率。CCK-8检测KIF5B干扰后HCT116和SW480细胞的增殖，并检测细胞内周期相关蛋白的表达。结果 KIF5B过表达及shRNA载体测序与原设计序列完全符合。重组病毒感染结直肠癌细胞中，可见绿色荧光蛋白表达。KIF5B过表达组细胞中KIF5B-FLAG蛋白大量表达，KIF5B沉默细胞中，KIF5B的蛋白表达量显著下降。KIF5B被敲低后，HCT116和SW480细胞增殖加快，细胞内p21、p16两种蛋白表达下调。结论 成功建立了KIF5B过表达和沉默的结直肠癌细胞模型，并且发现KIF5B表达被干扰后，可能会抑制p21与p16蛋白的表达，加速细胞周期，从而促进结直肠癌细胞增殖。
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单位北京医院; 中国科学院深圳先进技术研究院; 中国医学科学院
