姜黄素联合美罗培南对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达的影响

作者：宋梅; 马童惠; 张译如; 邬剑; 王泽宇; 李慧玲^*

来源：临床输血与检验, 2023, 25(06): 820-827.

• 耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌
• 姜黄素
• 美罗培南
• MexAB-OprM外排泵

目的 本课题旨在研究姜黄素（CUR）联合美罗培南（MEM）对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌（CRPA MexAB-OprM外排泵过表达的抑制作用。方法 微量肉汤法检测MEM的MIC，并通过MIC逆转倍数筛选出外排泵高表达的菌株；微量肉汤检测CUR的MIC；棋盘滴定法测定MEM和CUR的最佳联合浓度；PCR技术检测7株菌的mexA、mexB、oprM和mexR、nalC、nalD基因；qRT-PCR技术检测7株菌的mexB、oprM基因的表达水平；利用260nm处吸光度检测细菌细胞膜的完整性；溴化乙锭（EB）荧光累积和直接外排含量来观察MexAB-OprM外排泵的表达；qRT-PCR技术检测CUR-MEM联合和MEM单药处理细菌24h后mexA、mexB、oprM基因和调控基因mexR、nalC、nalD的表达水平。结果 30株CRPA筛选出7株外排泵MexAB-OprM高表达的菌株；微量肉汤法确定CUR的MIC为512～1024μg/mL；棋盘滴定法发现CUR显著降低了MEM的MIC值，两者有明显的协同作用，FIC指数为≤0.5;PCR技术均检测到mexA、mexB、oprM、mexR、nalC、nalD基因。qRT-PCR技术检测7株菌的mexB、oprM基因，发现PA21号菌株外排泵表达水平远高于其他6菌株；OD260nm吸光度检测实验发现128μg/mL的CUR没有破坏细胞膜的完整性，256和512μg/mL的CUR浓度能不同程度的破坏细胞膜；CUR单药组EB细胞内荧光累计百分比为11.2%、MEM单药组6.4%、CUR-MEM联合组为22.2%；与单药组相比，联合组差异有统计学意义（P <0.01,F=19.12）；直接EB外排实验发现EB含量的变化：CUR单药组降低10.6%,MEM单药组降低15.7%，药物联合组降低7.1%;qRT-PCR实验发现，药物联合组mexA、mexB、oprM基因与CUR组相比分别降低41.62%、39.57%、59.78%，与MEM单药组相比分别降低53.5%、48.44%、63.09%，差异有统计学意义（P <0.05,F=13.24,F=27.07,F=213.50）;qRT-PCR实验发现药物联合组的调控基因mexR与MEM组相比升高22.9%，差异具有统计学意义（P <0.05,F=9.64）,nalC与MEM组相比分别降低77.54%，差异具有统计学意义（P <0.001,F=46.21）,nalD与CUR单药组相比降低69.62%，与MEM组相比分别降低76.29%，差异具有统计学意义（P <0.001,F=66.41）。结论 CUR联合MEM可以抑制MexAB-OprM外排泵的过表达，CUR与MEM以浓度依赖性方式发挥协同作用。

• 单位
  佳木斯大学附属第一医院