养阴清热方通过下调JAK/STAT信号通路调节Treg/Th17平衡的实验研究

作者：掌琳惠; 马元婧; 缪蓉; 王伟; 翁文馨; 袁冬平; 龙军^*; 孙云霞^*

来源：南京中医药大学学报(自然科学版), 2022, 38(09): 810-818.

DOI：10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0810

• 动脉粥样硬化
• 养阴清热方
• + T细胞" name="keyword">CD4+ T细胞
• 调节性T细胞
• 辅助性T细胞17
• JAK/STAT

目的 研究养阴清热方(YHF)对脂多糖(LPS)导致的小鼠Treg/Th17失衡的影响及机制。方法 磁珠分选法提取小鼠脾脏CD4+ T细胞，用LPS刺激CD4+ T细胞，再以1、2、4 mg·mL-1的YHF水提液分别进行干预。MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞术检测CD4+ T细胞亚群Treg/Th17比例；ELISA法检测细胞上清中细胞因子IL-10、TGF-β、IL-6、IL-12p70的含量；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中Foxp3、RORγt及信号分子JAK/STAT的表达。结果 HPLC检测鉴定出YHF水提液中8种有效成分，分别为羟基红花黄色素A、虎杖苷、芦丁、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、白藜芦醇、槲皮素、大黄素和姜黄素。YHF水提液可以剂量依赖性地抑制LPS刺激的小鼠CD4+ T细胞的增殖(P<0.05),增加Treg的比例(P<0.05),降低Th17的比例(P<0.01),促进培养上清中Treg相关的抗炎因子IL-10和TGF-β的分泌，抑制Th17相关的致炎因子IL-6和IL-12p70的分泌。1、2、4 mg·mL-1 YHF均能增加Foxp3蛋白的表达(P<0.05),减少RORγt蛋白的表达(P<0.01)。1、2、4 mg·mL-1 YHF均能降低JAK2、STAT3及其磷酸化蛋白的表达(P<0.05)。4 mg·mL-1 YHF与JAK2特异性抑制剂AG490联用可以增加培养上清IL-10和TGF-β含量(P<0.05),降低IL-6和IL-12p70含量(P<0.05),而且可以显著降低p-JAK2、p-STAT3和RORγt蛋白表达(P<0.01,P<0.001),增加Foxp3蛋白表达(P<0.01)。结论 YHF可以有效抑制LPS诱导的小鼠CD4+ T细胞增殖，通过抑制JAK2和STAT3信号分子表达，增加Foxp3的表达和Treg数量，减少RORγt的表达和Th17数量，调节Treg/Th17平衡及抗炎细胞因子和促炎细胞因子的分泌。

• 单位
  南京中医药大学; 江苏省中医院