辐射诱导人TRAIL基因表达的腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定

作者：李艳博; 梁硕; 董丽华; **; 郭彩霞; 孙丽光; 龚守良

来源：吉林大学学报(医学版), 2008, 34(3): 364-368.

DOI：10.3969/j.issn.1671-587X.2008.03.003

• TRAIL
• 克隆
• 分子
• 腺病毒
• 辐射
• Egr-1

目的:构建辐射敏感Egr-1启动子诱导人肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-hTRAIL.方法:利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从pACCMV-hTRAIL质粒中扩增得到TRAIL基因片段,并将其连接到pMD19T载体进行测序,利用基因重组技术构建含有辐射诱导启动子Egr-1的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-hTRAIL.结果:PCR扩增出约820bp的片段,测序结果证实扩增片段的序列与GenBank公布(NM-003810)的一致.pshuttle-Egr1-hTRAIL用EcoR I、 Kpn I双酶切重组得到大小为3540和4299bp的2个片段,用Sma I酶切得到1517、2282和4040bp的3个片段,用BamH I酶切得到3304和4535bp的2个片段,与预期结果完全一致.结论:成功克隆了hTRAIL基因,并构建了辐射诱导表达的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-hTRAIL.

• 单位
  吉林大学第一医院; 吉林大学; 公共卫生学院