本发明涉及一种酶催化制备赖氨酸寡肽及其单甲氧基聚乙二醇修饰的方法,属于酶催化反应技术领域。其采用蛋白酶为催化剂催化合成酪氨酸寡肽,然后在寡聚酪氨酸寡肽的氨基末端接枝单甲氧基聚乙二醇,制备得到单甲氧基聚乙二醇修饰赖氨酸寡肽。本发明方法涉及的聚肽合成步骤的催化剂为酶多相催化剂,具有反应条件温和、环境更友好、副反应少等优点,而且避免了繁琐的保护和去保护步骤,提供了一种应用前景良好的制备单甲氧基聚乙二醇修饰赖氨酸寡肽的方法,其制备所得的赖氨酸寡肽条件温和、无污染,产率最高达35%。