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摘要
【目的】以黄河鲤为材料，从其肠道内分离具有产β-甘露聚糖酶功能的益生菌。【方法】采用平板水解圈法初筛，摇瓶发酵法复筛获得产β-甘露聚糖酶的菌株，通过形态学观察、生理生化试验、16S r RNA基因序列和比较基因组分析对该菌株进行鉴定，并用DNS定糖法测定酶学活性，用耐高温、耐酸、耐胆盐和平板打孔扩散法对其益生特性进行研究，用滤纸片法、腹腔注射法等对其生物安全性进行评价。【结果】本研究通过刚果红染色从鲤肠道中分离筛选出产β-甘露聚糖酶的细菌62株，其中HF-14109菌株产酶能力最强。通过形态学观察、生理生化试验、16Sr RNA基因序列和比较基因组分析对该菌株进行鉴定，确定该菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。酶学性质研究发现，该酶最适反应温度为45°C、最适p H为6.0，在温度20–80°C、p H 4.0–9.0范围内都较为稳定；Cu2+、Fe3+、Zn2+、Ba2+对该酶具有激活作用，而Mn2+、Ca2+对该酶具有抑制作用；对魔芋粉、瓜尔胶和槐豆胶都有较好的降解能力。生物学特性研究表明，HF-14109对酸、高温、胆盐具有较好的耐性，对大肠杆菌(Escherichiacoli)EC05、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda) ET 03、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) SA 16、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)Ah 01等均有抑制作用。安全性评价显示，用107、108、109浓度HF-14109菌悬液对黄河鲤腹腔注射后，未出现死亡及异常状况；该菌株对庆大霉素、卡那霉素、克林霉素、氯霉素、红霉素、链霉素、四环素、万古霉素、氨苄西林等均不具有耐药性。【结论】本研究从黄河鲤(Cyprinuscarpio)肠道筛选到一株产β-甘露聚糖酶的贝莱斯芽孢杆菌HF-14109，具有较高的酶活性和良好的酶学性质、益生特性和安全性，可作为潜在消除水产饲料中甘露聚糖抗营养因子的功能益生菌。
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