奶牛孕酮单克隆抗体的制备及其酶免疫测定方法的初步建立

作者：杨正涛; 张乃生; 冯晓琼; 曾文渊; 周虚; 张嘉保; 邵谱

来源：安徽农业科学, 2008, 36(18): 7659-7662.

DOI：10.3969/j.issn.0517-6611.2008.18.076

• 孕酮
• McAb
• 免疫测定

[目的]制备奶牛孕酮McAb,建立孕酮酶免疫检测方法,为研制检测试剂盒奠定基础.[方法]用琥珀酰亚胺法将孕酮与钥孔血蓝蛋白(KLH)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备完全抗原,免疫BalB/c小鼠,建立杂交瘤细胞株制备McAb,对McAb特异性、亚类、交叉反应性及相对亲和力等进行鉴定,筛选最佳McAb,建立酶免疫检测方法.[结果]获得3株杂交瘤1F6、2G6和2A11,腹水效价依次为1:1×106、1:1×105和1:8×104,其中1F6为IgG2b亚型,2G6和2A11为IgM亚型,3株McAb都能和游离孕酮发生特异性反应,相对亲和力1F6＞2G6＞2A11,其中1F6对雌二醇的交叉反应率小于0.01%.选用1F6与酶标孕酮建立ELISA检测方法,制作标准曲线,检测范围为0.5～100.0 ng/ml.[结论]该研究制备的单克隆抗体,可用于建立孕酮酶免疫检测方法,为奶牛孕酮水平的定量监测提供了较实用的方法.

• 单位
  吉林大学; 黑龙江八一农垦大学; 动物科技学院