靶向整合于MHCC97-H细胞的HBx基因shRNA表达载体的构建和鉴定

作者：王文龙; 孙会卿; 杨旭; 贺兴鄂; 雷建华; 童明

来源：中国医科大学学报, 2008, (04): 445-447+451.

• RNA干扰
• 短发夹RNA
• 乙型肝炎病毒x基因
• MHCC97-H细胞
• 整合

目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体;经酶切、PCR和测序鉴定;将鉴定的shRNA质粒脂质体转染MHCC97-H细胞,流式细胞分析转染效率。结果酶切、PCR及测序证实pshRNA-X169/X220/MOCK质粒构建符合设计,转染48h后MHCC97-H细胞可激发绿色荧光,pshRNA-X220转染效率最低。结论成功构建靶向整合于人肝癌细胞HBVx基因特异性shRNA表达载体,并成功转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,为沉默HBx基因实验性肝癌基因治疗奠定基础。

• 单位
  中南大学湘雅二医院