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摘要
目的：探讨抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的E3泛素连接酶活性对野百合碱（MCT）诱导的肺动脉高压（PH）大鼠肺血管重构以及相关信号通路的影响。方法：采用随机数字表法将42只SPF级健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠分为4组：对照组（n=6）、MCT模型组（n=15）、C25-140(TRAF6特异性E3泛素连接酶活性抑制剂)组（n=6）和MCT+C25-140组（n=15）。MCT及MCT+C25-140组大鼠于实验开始时颈后皮下单次注射MCT60 mg/kg，建立PH模型，其他2组大鼠皮下注射5%DMSO作为对照。C25-140组及MCT+C25-140组大鼠于第14天、21天和28天腹腔注射9.8 mg/kg C25-140。第28天行超声心动图检测评估大鼠肺动脉压力和心室收缩力变化，之后对大鼠进行安乐死并取肺组织。通过HE染色和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色评估大鼠肺血管形态；采用免疫共沉淀检测大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中信号转导及转录激活因子3(STAT3)的K63泛素化水平；Western blot检测大鼠肺组织中TRAF6、STAT3、p-STAT3及cyclin D1的表达水平；免疫荧光染色观察大鼠肺血管TRAF6和STAT3的共定位情况。结果：（1）与对照组比较，MCT组大鼠肺动脉血流加速时间（PAAT）和三尖瓣环平面收缩期位移（TAPSE）明显减少（P<0.05），血管中膜厚度明显增加（P<0.05）,α-SMA免疫荧光染色显示肺小血管明显肌化，提示造模成功。（2）与对照组相比，PH大鼠PASMCs中STAT3的K63泛素化明显升高。（3）MCT干预后28天，大鼠肺组织中TARF6、p-STAT3/STAT3比值及cyclin D1水平相对于对照组显著升高（P<0.05）；与MCT组相比，MCT+C25-140组大鼠PAAT、TAPSE明显上升（P<0.05），血管中膜厚度明显减小（P<0.05）。给予C25-140处理后，肺组织中TARF6、p-STAT3/STAT3比值及cyclin D1水平相对于MCT组显著降低（P<0.05）。（4）免疫荧光染色的结果显示MCT组大鼠肺小动脉中膜TRAF6与STAT3存在显著共定位，C25-140处理能显著抑制两者的相互作用。结论：抑制TRAF6的E3泛素连接酶活性可降低肺血管STAT3的磷酸化，下调cyclin D1表达，而且能减缓PH大鼠肺动脉中膜增厚，减轻肺血管重构。
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