细丝蛋白A shRNA慢病毒载体的构建及其干扰效率的检测

作者：黄文宇; 龙飞燕; 杨臣臣; 朱映柔; 黄芬; 初佳芮

来源：中国生物制品学杂志, 2016, 29(11): 1146-1149.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.001496

• 细丝蛋白A
• 短发夹RNA
• 干扰效率

目的构建细丝蛋白A(filamin A,FLNa)shRNA慢病毒载体,并检测其在肝癌细胞Hep G2和Huh7中的干扰效率。方法通过合成干扰基因片段,插入至shRNA慢病毒载体GV298中,构建FLNa shRNA慢病毒载体shRNAFilamin1和shRNA-Filamin2,转染Hep G2和Huh7细胞,荧光显微镜下观察红色荧光表达,Western blot法检测Filamin A干扰效率。结果构建的FLNa shRNA慢病毒载体经测序证明构建正确;转染24 h后,Hep G2和Huh7细胞可见红色荧光;转染48 h后,shRNA-Filamin1和shRNA-Filamin2的干扰效率在Hep G2细胞中分别约为45.4%和63.7%,在Huh7细胞中分别约为76.5%和78.3%。结论成功构建FLNa shRNA慢病毒载体,在Hep G2和Huh7细胞中干扰效率较高;可与多种病毒的受体蛋白相互作用,从而参与病毒的复制周期,为今后病毒复制及其致病机理的研究提供了新的思路。

• 单位
  昆明理工大学; 长春生物制品研究所; 云南大学