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摘要
目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在大鼠创伤后肝组织内质网应激(ERS)中的作用。方法 SPF级SD大鼠60只,按随机数字表法分组,每组6只。采用15 kg标准重物挤压大鼠双后肢(持续挤压3 h后,解压30 min、挤压30 min重复3次)建立创伤应激致急性肝损伤模型。实验一分为对照组和挤压后6、18、30 h组;实验二分为对照组、挤压模型组(挤压后18 h)、HMGB1抑制剂正丁酸钠(SB)或丙酮酸乙酯(EP)对照组、SB或EP干预组(挤压3 h后腹腔注射SB溶液500 mg/kg或EP溶液40 mg/kg)。用全自动生化分析仪检测血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平;常规苏木素-伊红(HE)染色后观察肝组织病理学改变;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织HMGB1蛋白和ERS相关蛋白的表达;用免疫组化法检测肝组织HMGB1表达及其转位。结果①与对照组比较,创伤应激后大鼠出现肝损伤病理学改变,血清AST、ALT水平明显增高,肝组织HMGB1及ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)、肌醇需求酶1α(IRE1α)表达明显增高,均于18 h达峰值;C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)表达则呈时间依赖性升高,于挤压后30 h达峰值。免疫组化结果显示,挤压后6 h肝组织HMGB1表达增多,可见部分HMGB1从细胞核向细胞质移位,18 h表现较为明显。②与挤压模型组比较,SB干预组和EP干预组HMGB1蛋白及ERS相关蛋白表达上调被抑制(HMGB1/β-actin:0.703±0.213、0.512±0.075比1.041±0.186,GRP78/β-actin:0.614±0.052、0.450±0.115比0.847±0.120,caspase-12/β-actin:0.636±0.066、0.812±0.142比1.086±0.130,CHOP/β-actin:0.314±0.046、0.621±0.123比0.996±0.764,IRE1α/β-actin:0.473±0.033、0.519±0.094比0.742±0.054,均P<0.05),血清AST和ALT水平明显降低[AST(U/L):1030.50±427.73、1414.50±347.86比2122.20±322.76,ALT(U/L):285.75±11.30、368.50±80.58比473.80±33.54,均P<0.01],急性肝损伤程度减轻。单纯SB或EP处理对各检测指标影响不大。结论 HMGB1-ERS通路参与介导了创伤引起的大鼠急性肝损伤。
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