转基因大豆MON89788实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立

作者：谢实龙; 汪小福^*; 丁晨露; 祝旋; 汤婷; 马同富; 蔡健; 徐俊锋^*

来源：农业生物技术学报, 2019, 27(07): 1301-1310.

• 转基因大豆MON89788
• 重组酶聚合酶扩增(RPA)
• qRT-PCR
• 快速检测
• 转基因大豆

MON89788是较早被批准商业化种植的转基因大豆(Glycine max)品种,种植范围广,产品流通量大。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification, RPA),针对MON89788的转化体特异性序列设计了引物和探针,利用正反向引物筛选的方法获得了最佳引物组合,并对反应的温度、引物和探针的浓度进行了优化选择。结果表明,RPA在29.5～43.1℃范围内都能扩增,对温度的容忍度较大,高浓度的探针会影响实时荧光RPA的扩增效率。同时对实时荧光RPA检测体系的特异性、灵敏度和适用性等进行测试,最终建立了MON89788实时荧光RPA检测方法。该检测方法特异性强,对MON89788的绝对检测限(absolute limit of detection, aLOD)可达到40拷贝,相对检测限(relative limit of detection, rLOD)为0.05%,对实际样品的检测在39℃,10 min内完成,是实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测时间的0.07～0.13倍。该恒温、快速的检测方法为转基因成分的快速检测提供了新的技术支持,有望用于转基因成分的现场快速检测。

• 单位
  浙江省植物有害生物防控重点实验室; 浙江省农业科学院; 阜阳师范大学