摘要

目的 探究人脐带间充质干细胞人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hucMSC)来源外泌体(exosomes)对心脏肌成纤维细胞促血管形成作用。方法 通过流式细胞术检测hucMSC相关表面标记。透射电子显微镜、Nanosight纳米颗粒分析仪和Western blot鉴定exosomes。采用CCK-8细胞增殖实验、Transwell实验、细胞划痕以及内皮细胞小管形成实验检测exosomes作用后心脏肌成纤维细胞对内皮细胞增殖、迁移和小管形成能力影响。实时荧光定量PCR等技术检测对照组和exosomes作用组心脏肌成纤维细胞VEGF-A水平,进一步加入β-catenin/TCF介导的转录抑制剂后,检测VEGF-A表达水平。结果 hucMSC不表达CD19、CD34和CD45,而高表达CD29、CD105和CD90,与间充质干细胞特性相符。经鉴定其exosomes粒径约100~200 nm,相较hucMSC,exosomes高表达CD81,低表达GAPDH,不表达内质网特异性分子Calnexin,这些均与exosomes特征相符。免疫荧光细胞化学染色发现心脏肌成纤维细胞高表达α-SMA,exosomes作用后心脏肌成纤维细胞促进内皮细胞增殖、迁移和小管形成能力。进一步检测发现exosomes作用后心脏肌成纤维细胞VEGF-A水平增加,加入β-catenin/TCF介导的转录抑制剂后,VEGF-A表达水平降低。结论 hucMSC来源exosomes增强心脏肌成纤维细胞血管形成作用。