猪伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白gD主要抗原表位区基因的克隆及原核表达

作者：罗飞; 李宇琴; 周洁; 南文龙; 陆明哲; 陈义平

来源：中国畜牧兽医, 2011, (11): 83-86.

• 伪狂犬病病毒
• gD糖蛋白
• 主要抗原表位
• 原核表达 pseudorabies virus
• envelope glycoprotein gD
• major epitope domain
• prokaryotic expression

本试验通过PCR方法以猪伪狂犬病病毒SD株的基因组DNA为模板扩增得到了含gD主要抗原表位编码区的片段,将该PCR产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游。构建的重组质粒pET-gD经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子质量约为45.2ku,主要以包涵体形式存在。表达产物用His亲和层析柱纯化。Western blotting结果显示,该纯化蛋白能与猪伪狂犬病病毒抗体阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原反应性,可以作为猪血清伪狂犬病病毒抗体诊断用抗原。

• 单位
  中国动物卫生与流行病学中心; 扬州大学