牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定

作者：李德华; 苟兴华; 胡海洋; 徐琦; 刘忠荣; 吴洽庆; 余晓东

来源：应用与环境生物学报, 2006, (06): 819-823.

• 肠激酶(enterokinase
• EK)
• 甲醇酵母(Pichia pastoris)
• 高密度发酵 enterokinase
• Pichia pastoris
• high-density fermentations

肠激酶(enterokinase,EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastorisSMD1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、rEKL(recombinant enterokinase light chain,rEKL)纯化、N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其...

• 单位
  四川大学; 重庆师范大学; 中国科学院成都生物研究所; 成都地奥制药集团有限公司