2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株的构建

作者：王悄悄; 郑峰; 刘旭苗; 林苗; 倪华; 王怡雯; 曹祥荣; 汪春晖^*; 潘秀珍^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(07): 770-778.

DOI：10.13350/j.cjpb.220706

• 2型猪链球菌
• 酪氨酸激酶Cps2C
• 过表达株

目的 构建2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株，为cps2C基因功能研究提供实验材料。方法 使用重叠延伸PCR技术将延伸因子TufA(又名EF-Tu,编码基因为SSU05＿0530)的启动子(命名为P0530)与cps2C基因连接为P0530cps2C片段，将P0530cps2C酶切后连接至猪链球菌-大肠埃希菌穿梭质粒pSET2,构建过表达质粒pSET2::P0530cps2C。将pSET2::P0530cps2C电转化导入S.suis 2野生毒株05ZYH33感受态细胞，抗性及组合PCR筛选得到cps2C过表达株。qRT-PCR检测过表达株cps2C基因的转录水平。结果 重叠延伸PCR成功将P0530启动子片段(300 bp)和cps2C基因片段(696 bp)拼接为P0530cps2C(996 bp),片段及载体经BamH I和EcoR I酶切后连接，成功构建出过表达质粒pSET2::P0530cps2C;将pSET2::P0530cps2C电转化导入S.suis 2 05ZYH33感受态细胞，抗性筛选及组合PCR检测结果显示cps2C过表达株构建成功。提取野生株05ZYH33和cps2C过表达株总RNA后进行qRT-PCR实验，结果显示过表达株cps2C基因的相对表达水平较05ZYH33株上调2.4倍。结论 本研究选用S.suis 2 05ZYH33的延伸因子TufA强启动子P0530作为启动子，成功构建过表达质粒pSET2::P0530cps2C并导入S.suis 2感受态细胞，成功获得cps2C过表达株，为进一步研究酪氨酸激酶Cps2C功能提供实验材料。

• 单位
  南京师范大学; 喀什大学; 生命科学学院