人源性Notch 1胞内段真核表达载体的构建及鉴定

作者：李斌; 梁亮; 甄海宁; 林伟; 晁晓东; 董文鹏; 李娟; 章翔

来源：中华神经外科疾病研究杂志, 2008, (01): 32-36.

• Notch信号
• 胶质细胞瘤
• 真核表达

目的构建人源性Notch 1胞内段(NICD)真核表达载体pIRES2-EGFP-NICD,并观察其在真核细胞中的表达。方法通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人脑胶质母细胞瘤细胞系U251细胞中获得编码NICD的cDNA,定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP;经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内NICD的表达。结果构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NICD,将其转染HeLa细胞72h后,蛋白免疫印迹法检测到细胞内NICD的表达显著增高。结论成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NICD,为研究Notch信号通路在人脑胶质细胞瘤发生发展中的作用机制奠定了基础。

• 单位
  第四军医大学