人生长终止特异性同源盒基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

作者：郑辉; 薛松; 黄日太; 胡振雷; 汪永义

来源：医学研究生学报, 2011, 24(3): 246-249.

DOI：10.3969/j.issn.1008-8199.2011.03.005

• 生长终止特异性同源盒基因
• 腺病毒载体
• 基因重组

目的 生长终止特异性同源盒(growth arrest-specific homeobox,Gax)基因表达产物是核转录因子,主要存在于心血管系统中,对胚胎发育、细胞生长、分化和迁移等起基因调控作用,其表达异常与多种疾病相关.为深入研究Gax基因在临床疾病中的作用,文中构建表达了人Gax基因的重组腺病毒载体.方法 根据pEGFP-N1-Gax质粒的多克隆位点,用NheⅠ和Hind Ⅲ双酶切获得人Gax基因片段,连接至穿梭质粒pDC18-mCMV上,构建穿梭质粒pDC318-mCMV-Gax,然后与骨架质粒pPE3共转染293包装细胞,同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒载体Ad5-Gax,反复感染293细胞扩增病毒后,氯化铯梯度离心纯化病毒,并测定病毒滴度.结果 穿梭质粒pDC318-mCMV-Gax经双酶切和测序证实构建成功;PCR鉴定人Gax基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度为4.5×1010pfu/ml.结论 该研究成功构建了重组腺病毒载体Ad5-Gax,为进一步在体内外研究Gax基因参与多种疾病的发生发展提供了材料.

• 单位
  上海交通大学