含4种食源性病毒检测靶标多联装甲RNA的制备、纯化与定值

作者：姚琳; 张奇; 李风铃; 张媛; 逄凤娇; 江艳华^*; 王联珠; 翟毓秀

来源：食品科学, 2019, 40(08): 293-299.

• 食源性病毒
• 多联装甲RNA
• Qβ噬菌体
• 阳性质控样品
• 实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应

基于Qβ噬菌体装甲RNA制备平台构建同时含有诺如病毒(norovirus,NoV)、甲肝病毒(hepatitis Avirus,HAV)、轮状病毒(rotavirus,RV)、星状病毒(astrovirus,AstV)检测靶标RNA的多联装甲RNA(multiplexarmoredRNA,AR-MulV),并进行纯化与初步定值。结果表明,重组质粒在大肠杆菌中成功表达,表达产物大小约为14.1 kDa;制备的AR-MulV经纯化后无杂蛋白与残留重组质粒,电镜下可见大量结构形态完整的病毒样颗粒,大小约为25 nm。初步定值结果显示,AR-MulV中GⅠ型NoV、GⅡ型NoV、HAV、RV和AstV检测靶标RNA的含量分别为(1.24±0.2)×107、(2.54±0.6)×107、(2.24±0.3)×107、(2.96±0.5)×107 copies/μL和(3.19±0.4)×107 copies/μL。本研究基于Qβ噬菌体装甲RNA制备平台成功制备同时包含4种食源性病毒标准方法检测靶标的多联装甲RNA,为食源性病毒的分子检测以及多重实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应阳性质控样品的研发提供新思路。

• 单位
  农业部; 獐子岛集团股份有限公司; 中国水产科学研究院黄海水产研究所