UHRF1基因沉默对逆转人肺腺癌A549细胞顺铂耐药性的影响

作者：杨从容; 赵学涛; 王军; 吴凤鹏; 边晨峰

来源：肿瘤, 2015, 35(08): 834-841.

• 癌,非小细胞肺
• 抗药性
• RNA干扰
• UHRF1基因

目的:检测泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like with PHD and ringfinger domain 1,UHRF1)基因在人肺腺癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中的表达差异,并探讨沉默UHRF1基因对逆转A549/DDP细胞对DDP耐药性的影响。方法:采用半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测UHRF1 m RNA和蛋白在A549及A549/DDP细胞中的表达差异。随后构建靶向沉默UHRF1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)质粒表达载体,并采用慢病毒感染法感染至A549/DDP细胞,同时设未进行感染的空白对照组和感染非特异性sh RNA的阴性对照组。采用蛋白质印迹法检测各组细胞中UHRF1蛋白的表达水平。采用MTT法检测各组细胞在DDP作用下的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。采用FCM法检测细胞凋亡率。采用蛋白质印迹法检测凋亡调节因子Bcl-2和Bax的表达情况。结果:UHRF1 m RNA和蛋白在A549/DDP细胞中的表达水平显著高于亲代A549细胞(P<0.01)。靶向UHRF1基因的sh RNA明显下调A549/DDP细胞中UHRF1蛋白的表达水平(P<0.01)。在不同浓度DDP作用24 h后,UHRF1-sh RNA组A549/DDP细胞的IC50值明显低于空白对照组和阴性对照组,对DDP的敏感性显著提高(P值均<0.01)。DDP(6 mg/L)作用24 h后,UHRF1-sh RNA组细胞的凋亡率及促凋亡蛋白Bax的表达水平较空白对照组和阴性对照组明显增高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平则明显下调(P值均<0.01)。结论 :UHRF1基因在人耐药肺腺癌细胞中呈现高表达,提示UHRF1参与肺腺癌耐药的形成;UHRF1-sh RNA可特异性下调UHRF1的表达,逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,并通过调节凋亡相关基因的表达促进其凋亡。UHRF1基因可能成为逆转肺癌耐药性的一个新的分子靶点。

• 单位
  定州市人民医院; 河北医科大学第四医院