甲基营养菌Methylobacterium sp.MB200中部分一碳代谢相关基因的定位及mtdA和mtdB基因的克隆研究

作者：宋修鹏; 武波; 申佩弘; 蒋承建; 田丹丹; 唐咸来

来源：中国生物工程杂志, 2011, 31(02): 50-55.

DOI：10.13523/j.cb.20110209

• 甲基营养菌
• 突变体库
• pTnMod-RKm’
• TAIL-PCR
• mtdA
• mtdB Methylobacterium Mutants library pTnMod-RKm' TAIL-PCR mtdA mtdB

以甲基营养细菌Methylobacterium sp.MB200为出发菌株,首先利用质粒转座子(pTnMod-RKm’)构建了目的菌株MB200的部分突变体库,获得能够在双抗性MMII板上生长的突变体共11552株,然后在双抗性MMI板上复筛获得不能够利用甲醇的突变体333株(初步认为是一碳代谢途径被破坏的突变株),为一碳代谢相关基因的克隆研究奠定了基础。随后利用TAIL-PCR技术快速准确地从突变体库中定位了部分与一碳代谢相关的基因,并根据pTnMod-RKm’具有复制起始位点能够快速克隆插入位点侧翼序列的特性克隆到mtdA和mtdB基因的全序列并进行了初步分析。

• 单位
  广西壮族自治区科学技术厅; 广西大学