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摘要
目的探讨星形胶质细胞与神经元共培养系统中,缺氧缺血后星形胶质细胞表达的整合素β8对神经元凋亡的影响。方法取新生13 d SD大鼠及孕16 d SD大鼠的胎鼠脑皮质,分别分离培养星形胶质细胞及神经元,免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。取缺氧缺血培养复氧后12 h、1 d、2 d星形胶质细胞(实验组)以及正常星形胶质细胞(对照组),RT-PCR检测细胞整合素β8表达变化。利用整合素β8小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)感染抑制星形胶质细胞整合素β8表达,实时荧光定量PCR检测其抑制效率。取正常神经元及星形胶质细胞共培养(共培养缺氧缺血组)、经整合素β8 siRNA感染后2 d的星形胶质细胞与正常神经元共培养(β8 RNA干扰组)以及正常神经元(单纯缺氧缺血组),行体外模拟缺氧缺血处理;复氧后1 d收集细胞,TUNEL染色法检测整合素β8对神经元凋亡的影响;以正常神经元作为对照组。结果免疫细胞化学染色鉴定示,星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白及神经元神经核阳性率均达90%以上。与对照组相比,实验组星形胶质细胞中整合素β8 mRNA表达在复氧后12 h即增加,1 d时达峰值,2 d时仍维持较高水平;各时间点实验组与对照组比较及实验组复氧后各时间点间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);整合素β8 siRNA感染后,实验组整合素β8 mRNA表达明显降低,感染后2 d降至最低值(P<0.05)。TUNEL检测示,与对照组相比,单纯缺氧缺血组、共培养缺氧缺血组及β8 RNA干扰组神经元凋亡明显增多(P<0.05);共培养缺氧缺血组及β8 RNA干扰组细胞凋亡指数较单纯缺氧缺血组明显降低,共培养缺氧缺血组低于β8 RNA干扰组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧缺血后,星形胶质细胞中整合素β8表达增高,神经元凋亡率下降,对受损神经元具有明显保护作用。
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单位四川大学; 四川大学华西第二医院
