平肝益肾方对MPP+损伤SH-SY5Y细胞自噬及相关蛋白表达的影响

作者：刘京京; 高鑫; 卢芳; 刘树民^*

来源：世界中西医结合杂志, 2020, 15(12): 2246-2251.

DOI：10.13935/j.cnki.sjzx.201219

• 帕金森病
• 平肝益肾方
• 自噬
• SH-SY5Y细胞
• 3-甲基腺嘌呤

目的通过细胞和分子生物实验,观察平肝益肾方对MPP+损伤人神经母细胞瘤母细胞(SHSY5Y)细胞活性、生长情况以及自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)表达的影响,初步探讨平肝益肾方对帕金森病(PD)神经保护作用的可能机制。方法以SH-SY5Y细胞为研究对象,分为空白组、模型组、平肝益肾方组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,空白组换用完全培养基培养细胞,其余组均加入0.437 mmol/L MPP+,构建MPP+损伤SH-SY5Y细胞模型,平肝益肾方组加入193.6μg/ml平肝益肾方药液,3-MA组加入193.6μg/ml平肝益肾方药液和5 mmol/L 3-MA试剂。用MTT法检测其细胞活性;在细胞实时无标记细胞功能分析仪x CELLigence RTCA系统上检测其细胞生长时slope值平均值变化;蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3B表达。结果与空白组比较,模型组细胞活性显著降低(P <0.01),曲线slope值平均值降低,自噬相关蛋白Beclin1、LC3B着色明显减少且着色强度明显减少(P <0.01,P <0.01);与模型组比较,平肝益肾方组细胞活性显著升高(P <0.01),曲线slope值平均值升高,自噬相关蛋白Beclin1、LC3B着色明显增多且着色强度显著增强,表达显著升高(P <0.01,P <0.05);与平肝益肾方组比较,3-MA组细胞活性降低(P <0.05),曲线slope值平均值降低,自噬相关蛋白Beclin1、LC3B着色明显减少且着色显著减弱,表达显著降低(P <0.01,P <0.05)。结论平肝益肾方明显增强细胞活性,细胞逐渐增殖,通过上调神经细胞自噬活性,自噬相关蛋白Beclin1、LC3B表达增加,保护神经细胞,是其对PD神经保护作用的可能机制。

• 单位
  黑龙江中医药大学