嗜水气单胞菌丝氨酸羟甲基转移酶基因的克隆及酶学分析

作者：黄飞; 吴高兵; 黄小罗; 洪玉枝

来源：农业生物技术学报, 2010, (04): 783-787.

• 丝氨酸羟甲基转移酶
• 亲和层析
• 嗜水气单胞菌 Serine hydroxymethyltransferase
• Affinity chromatography
• Aeromonas hydrophila

以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)基因组DNA为模板,通过PCR方法首次克隆了该菌的丝氨酸羟甲基转移酶基因(glyA)。将该基因插入到表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,获得含有重组质粒pGEX-glyA的重组菌株。核苷酸序列测定表明该基因(GenBank登录号:FJ797607)全长1254bp,编码417个氨基酸。重组菌株IPTG诱导表达后,经过GST-tag亲和层析纯化,得到约45kD的目的蛋白。对纯化的丝氨酸羟甲基转移酶进行酶学性质分析表明,该酶的最适反应为pH8.0,最适反应温度为20℃,Cu2+和Mn2+对...

• 单位
  华中农业大学; 农业微生物学国家重点实验室