miR-515-5p通过靶向TRIM31调控PI3K/AKT信号通路对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

作者：刘昌化; 罗康宁^*; 闫圣玉; 尹恺

来源：医学研究生学报, 2022, 35(05): 478-484.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2022.05.006

• 结直肠癌
• miR-515-5p
• TRIM31
• PI3K/AKT信号通路
• 增殖
• 侵袭

目的 MiR-515-5p是一种抑癌基因，其在结直肠癌(CRC)中的作用及机制有待于研究。文章探讨miR-515-5p过表达对CRCHT-29细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法 采用qRT-PCR法检测81例CRC癌组织和癌旁组织以及结肠上皮细胞NCM460和CRC细胞系(SW620、HCT116、HT-29和SW480)中miR-515-5p的表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-515-5p和三结构域蛋白31(TRIM31)的靶向关系。将miR-515-5p mimic及其阴性对照(mimic NC)和TRIM31过表达质粒载体(pcDNA3.1-TRIM31)及其空白载体(Vector)转染至HT-29细胞中，分为blank组(未转染质粒)、mimic NC+Vector组(共转染mimic NC和Vector质粒)、miR-515-5p mimic组(转染miR-515-5p mimic)、pcDNA3.1-TRIM31组(转染过表达质粒pcDNA3.1-TRIM31)和mimic+pcDNA3.1-TRIM31组(共转染miR-515-5p mimic和过表达质粒pcDNA3.1-TRIM31);qRT-PCR检测细胞中miR-515-5p与TRIM31 mRNA表达水平；CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力；Transwell检测细胞侵袭和迁移能力；Western blot检测细胞中TRIM31、PI3K(p110α)、p-AKT(Ser473)和AKT等蛋白表达水平。结果 CRC癌组织及细胞系中miR-515-5p的表达水平显著低于CRC癌旁组织和结肠上皮细胞(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实，TRIM31是miR-515-5p靶基因。过表达miR-515-5p可明显上调HT-29细胞中miR-515-5p表达水平，抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力，并下调TRIM31 mRNA及TRIM31、PI3K和p-AKT蛋白表达水平(P<0.01)。而过表达TRIM31可显著上调HT-29细胞中TRIM31 mRNA和蛋白表达，促进细胞增殖、迁移和侵袭，并上调PI3K和p-AKT蛋白表达水平(P<0.01)。平板克隆形成实验结果显示，与blank组细胞克隆数[(126.67±8.08)个/孔]或mimic NC+Vector组细胞克隆数[(123.33±6.51)个/孔]比较，mimic组HT-29细胞克隆数[(50.00±11.53)个/孔]明显降低(P<0.01),而pcDNA3.1-TRIM31组HT-29细胞克隆数[(197.33±20.21)个/孔]明显增加(P<0.01);与mimic组比较，mimic+pcDNA3.1-TRIM31组HT-29细胞克隆数[(152.33±7.64)个/孔]又明显增加(P<0.01)。此外，过表达TRIM31可显著逆转miR-515-5p mimic对HT-29细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.01)。结论 miR-515-5p在人CRC癌组织和细胞系中低表达，过表达miR-515-5p可抑制HT-29细胞增殖、侵袭和迁移，其机制可能与靶向TRIM31调控PI3K/AKT信号通路有关。

• 单位
  南华大学