摘要
目的探讨miR-584对胃黏膜肠上皮化生模型细胞的影响及其对细胞自噬、凋亡的调控作用,以及安胃汤的干预作用。方法:采用鹅去氧胆酸(CDCA)制备胃黏膜肠上皮化生细胞模型,miR-584mimics、miR-584mimicsNC、miR-584inhibitor、miR-584inhibitorNC分别转染胃黏膜上皮细胞,并用安胃汤含药血清进行干预。运用Westernblot法验证胃黏膜肠上皮化生细胞模型;免疫荧光分析肠化相关蛋白SOX2、CDX2的表达;AnnexinV-PE/7-AAD流式双染法检测细胞凋亡;qRT-PCR以及Westernblot法检测各组细胞中LC3、Bax的相对表达;应用透射电镜观察细胞超微结构及自噬情况。结果与正常组比较,模型组MUC2和KLF4蛋白表达、自噬小体数量、LC3表达均增加,SOX2荧光强度及凋亡率、Bax表达减小(P<0.05),miR-584表达略有增加(P>0.05);与空白对照组比较,安胃汤组CDX2表达、自噬小体数量、LC3表达均降低,SOX2表达及凋亡率、Bax表达增加(P<0.05),miR-584表达降低(P>0.05);与转染对照组比较,miR-584过表达组miR-584表达显著增加(P<0.05),CDX2荧光强度显著增加且SOX2荧光强度降低,自噬小体数量、LC3和Bax表达、凋亡率均降低(P<0.05);miR-584抑制组miR-584表达显著降低(P<0.05),CDX2荧光强度降低,SOX2荧光强度、自噬小体数量、LC3表达、凋亡率、Bax表达均增加(P<0.05)。结论安胃汤可抑制肠上皮化生模型细胞的自噬,并促进细胞凋亡,体外实验可减轻GIM模型细胞的肠上皮化生程度。miR-584可通过调节细胞自噬,抑制其凋亡,诱导胃黏膜上皮细胞-间充质转化,加重肠化。
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单位广西中医药大学; 广西中医药大学附属瑞康医院